病原微生物检测方法类作业指导书的编写随所检病原微生物的不同而有所区别，但其基本内容应包括：操作规程名称、目的、适用范围、职责、引用文件、设备和材料、培养基和试剂、检测要点、检测程序及流程图、操作步骤、检测结果的判定方法、检测结果的报告和解释、相应的职业规范、健康和安全操作指南、出现问题时应采取的措施、附录(相关的附加文件，如设备或试剂盒说明书等)等。

例如：

HIV抗体检测操作规程

1 目的

为规范HIV抗体检测操作，确保检测结果准确可靠，杜绝检测质量和生物安全事故，特制定本操作规程。

2 适用范围

适用于HIV抗体的筛查和确认实验。

3 职责

检验人员应严格执行本操作规程，对检测结果和生物安全负责;质量监督员对执行情况进行监督检查，对违反本操作规程者，可责令其停止工作，及时改正;实验室负责人作为生物安全的第一责任人负责检测过程中的生物安全。

4. 操作方法

(一)检测试剂

1、筛查试剂必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、批批检验合格、临床评估质量优良、在有效期内的试剂。目前常用的筛查试剂有酶联免疫、颗粒凝集和其它快速诊断试剂。采供血机构进行血液筛查应采用HIV一1/2混合型酶联免疫试剂。

2、确认试剂必须经国家食品药品监督管理局注册批准。确认试剂包括免疫印迹试剂、条带免疫试剂及免疫荧光试验试剂。目前以免疫印迹试剂最为常用。

(二)检测要点

l、严格按照试剂说明书操作，不得擅自更改。

2、注意防止交叉污染。

3、严格遵守实验室操作规程。

(三)检测程序及流程图

l、筛查试验

标本验收合格后，用筛查试剂进行检测，如呈阴性反应，报告HIV抗体阴性;对呈阳性反应的标本，须进行重复检测。

2、重复检测

对筛查呈阳性反应的标本用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂家的试剂重复检测。如两种试剂复测均呈阴性反应，则报告HIV抗体阴性;如均呈阳性反应，或一阴一阳，需将重新采集的受检者血液标本和原有标本一并进行确认试验。

3、筛查试验的流程图

筛查试验流程图

(四)HIV抗体确认试验

l、常用的确认实验方法是免疫印迹法(WB)。

2、免疫印迹试剂有HIV一1/2混合型和单一型。一般先用HIV一1/2混合型试剂进行检测，如果呈阴性反应，则报告HIV抗体阴性，如果呈阳性反应，则报告HIV—l抗体阳性，如果不满足阳性标准，则判为HIV抗体不确定。如果出现HIV一2型的特异性指示条带，还需要用HIV一2型免疫印迹试剂再做单一的HIV一2型抗体确认试验，呈阴性反应，报告HIV一2抗体阴性;呈阳性反应的则报告HIV一2抗体血清学阳性。如需要进行鉴别，还应进行核酸序列分析。

3、HIV抗体确认试验流程图

HIV抗体确认试验流程图

(五)确认试验结果的判定：使用免疫印迹法(WB)确认时我国的判定标准为：

l、HIV—I抗体阳性(+)

至少有二条env带(gp4l和gpl60/gpl20)出现，或至少一条env带和p24带同时出现。

2、HIV一2抗体血清学阳性(+)

同时符合以下二条标准可判为HIV一2抗体血学阳性：

(1)符合WHO阳性判定标准，即出现至少二条env带(gp36和gpl40/gpl05);

(2)符合试剂盒提供的阳性判定标准。

3、HIV抗体阴性(一)

无HIV抗体特异带出现。

4、HIV抗体不确定(±)：

出现HIV抗体特异带，但不足以判定阳性。

注：①HIV—l抗体特异带包括：env带：gpl60/gp120、gp41; gag带：p55、p24、p17(或p18);pol带：p66(或p65)、p51、p31。

②HIV一2抗体特异条带包括：env带：gpl40/gpl05、gp36;gag带：P56、p26、p16;pol带：p68、p53、p34。(由于使用的毒株不同，HIV一2 env抗原也可为gpl25/gp80、 gp36)。

上述标准为判定免疫印迹试验结果的基本原则，在实际工作中还应参照所用试剂的说明书综合判定，遇疑难情况应报上级实验室解决。

(六)检测结果的报告和处理

l、HIV抗体筛查

筛查试验呈阴性反应出具HIV抗体阴性报告。

筛查试验呈阳性反应，可出具“HIV抗体待复查”报告(附表1)，不能出阳性报告。同时应尽快进行以下处理：

(1)填写HIV抗体复查送检单(附表2)，经一名检测操作人员和一名具有中级以上技术职称的人员审核签字。

(2)尽可能重新采集受检者的血样。

(3)将二份血样(或仅原血样)连同HIV抗体复查送检单一并送确认实验室确认。

(4)做好检测后咨询。

2、HIV抗体确认

HIV抗体阳性应出具HIV抗体阳性确认报告(附表3)，并按相关规定做好咨询、保密和报告工作。

HIV抗体阴性应出具HIV抗体阴性确认报告，如果近期有高危行为，如性乱、注射毒品等，或有急性流感样症状等情况，为排除“窗口期”的可能，可以进行HIV—l P24抗原或HIV核酸检测，或2--3个月以后再做抗体检测。

HW抗体不确定出具HIV抗体不确定确认报告，在备注中应注明“3个月后复查”。同时进行以下处理：

(1)随访复查：每3个月随访复查一次，连续2次，共6个月。如果检测时暴露时间已超过3个月，则在l一2个月后随访1次即可。将前后二份样品同时检测，仍呈不确定或阴性则报告HIV抗体阴性，如果在随访期间发生带型进展，符合HIV抗体阳性判定标准则报告HIV—l或HIV一2抗体阳性。

(2)必要时可做HIV—l P24抗原或HIV核酸测定，但检测结果只能作为辅助诊断依据，确认报告要依据血清学随访结果。

(3)做好检测后咨询。

HIV抗体确认报告由一名具有高级卫生技术职称的人员复核签字，按原送检程序反馈。 本中心难以确认的标本，送国家艾滋病参比实验室确认。同一受检对象的标本在不同艾滋病确认实验室得到不一致的确认结果时，由国家艾滋病参比实验室和HIV确认实验室审评专家组予以仲裁。

3、HIV抗体检测情况的报告

艾滋病确认中心实验室应及时收集、整理和分析辖区内HIV抗体检测情况，于每季首月15日前向省级卫生行政部门和国家艾滋病参比实验室报告。

在非送检标本中(如专项调查与研究等)发现的艾滋病病毒抗体阳性者，亦应填写附表4，报中国疾控中心性艾中心。

(七)HIV感染监测工作中实验室检测策略

符合下列实验室条件、HIV抗体筛查试剂条件和HIV抗体阳性判定标准者，可按HIV感染报告疫情。

1、实验室条件：

(1)本年度质量考评成绩优良;

(2)有严格的实验室质量管理制度。

2、HIV抗体筛查试剂条件

(1)经过国家食品药品监督管理局批准或注册、批批检合格、临床评估质量优良。

(2)复测须用两种不同原理或不同厂家的筛查试剂(含第三代ELISA试剂)。

3、HIV抗体阳性的判定条件

(1)两种试剂复测均为阳性，且第三代ELISA试剂复测样品OD值与临界值(Cutoff)的比值(S/CO)≥6.0。

(2)两种试剂复测结果均为阳性，但第三代ELISA试剂复测S/CO比值在1.0～6.O之间，或两种试剂复测结果呈一阴一阳，应进一步作确认，按照确认试验的判定标准判断结果。